Método imunomagnético associado ao meio MesenCult® na obtenção de células mononucleares da medula óssea de coelhos negativas para o anticorpo monoclonal CD45 / Immunomagnetic method associated with MesenCult® medium to obtain bone marrow mononuclear cells from rabbits negative for CD45 monoclonal antibody

O objetivo detse artigo é de descrever um protocolo de isolamento das células mononucleares da medula óssea de coelhos, seguido de purificação celular por depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 e posterior expansão em meio de cultura MesenCult®. Dez coelhos machos adultos, da raça Nova Zelândia, com idade média de 1,0±0,2 anos e peso médio 3,5±0,24kg, foram utilizados para padronização da metodologia. O isolamento das células mononuclares da medula óssea foi realizado pelo gradiente de densidade Ficoll-paque® e a purificação e obtenção das células- pela depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 em base imunomagnética. A população celular obtida foi expandida posteriormente em meio de cultura MesenCult®. No isolamento pelo gradiente de icoll-Paque® foi obtido um rendimento médio de 7,31x106 células/mL. Após purificação e obtenção das possíveis células-tronco mesenquimais pela base imunomagnética, houve um decréscimo do rendimento para 2,28x106 células/mL, mas o processo de expansão foi incrementado pelo cultivo celular. Os resultados indicaram que as células obtidas da fração mononuclear da medula óssea, cultivadas in vitro foram capazes de gerar células aderentes 24 horas após o cultivo, com predominância de células fibroblastóides sugestivas de células-tronco mesenquimais. Concluiu-se que a obtenção de células-tronco mesenquimais pode ser alcançada após purificação das células mononucleares da medula óssea de coelhos pelo método imunomagético, o meio de cultura MesenCult® proporciona um ambiente adequado para a rápida expansão in vitro e o número de passagens exerce influência negativa sobre as características morfológicas das células.

The objective of this study was to describe guidelines for the isolation of bone marrow mononuclear cells from rabbits, followed by cell purification by negative depletion with CD45 monoclonal antibody, and further expansion in MesenCult® medium. Ten adult male New Zealand White rabbits, age average of 1.0±0.2 years and weighting 3.5±0.24kg, were used to obtain a standardized method. The mononuclear cells of the bone marrow were isolated with Ficoll-paque® density gradient centrifugation, and the cell purification and acquisition was completed by negative depletion with CD45 monoclonal antibody in immunomagnetic base. The cell population obtained was expanded in MesenCult® medium. Through isolation with Ficoll-paque® density gradient was possible to obtain an average yield of 7.31x106 cells/mL. After purification and acquisiton of potential mesenchymal stem cells by the immunomagnetic base, there was a yield decrease to 2.28x106 cells/mL; however the expansion process was increased in cell culture. The results indicated that cells obtained from the mononuclear fraction of bone marrow and cultivated in vitro were capable to generate adherent cells 24 hours after culture, with predominance of fibroblastoid cells suggestive of mesenchymal stem cells. It can be concluded that mesenchymal stem cells can be achieved with purified rabbit bone marrow mononuclear cells through the immunomagnetic method, as the MesenCult® medium provides a suitable environment for a quick in vitro expansion, and the number of passages exerts negative influence on the morphological characteristics.

Anatomy of the developing fruit of Metrodorea nigra a. st.-hil. (rutaceae)

El pericarpio y la semilla en desarrollo de Metrodorea nigra fueron examinados estructuralmente. Flores y frutos enetapas diferentes de maduración se fijaron en FAA 50 y se seccionaron transversal y longitudinalmente, según técnicas usuales en estudios anatómicos. El epicarpio diferenciado está representado por la peridermis de origen subepidérmico. El mesocarpio es parenquimatoso. El endocarpio es esclerenquimatoso y se origina de la acción meristemática de la epidermis del ovario. La semilla es endotestal y se origina del óvulo anátropo, crasinucelado y con dos tegumentos. La nucela y endospermo aparecen en pequeña cantidad en la semilla madura. El embrión es recto y posee cotiledones de reserva. La semilla y el endocarpio son eyectados en el proceso autócoro que ocurre en la especie. El fruto es capsular, tipo coccarium.

Pericarp and seed in development of Metrodorea nigra are investigated structurally. Flowers and fruits in different stages of maturation were fixed in FAA 50 and cross- and longitudinally sectioned, according to usual techniques. The differentiated epicarp is represented by the periderm of subepidermal origin. The mesocarp is parenchymatous. The endocarp is sclerenchymatous and originates from the meristematic action of the inner epidermis of the ovary. The seed is endotestal and originates from an anatropous, bitegmic and crassinucellate ovule. The nucellus and the endosperm occur in small quantity in the mature seed. The embryo is straight with thick cotyledons. The seed and the endocarp are ejected in the autochory process. The fruit is capsular and coccarium(.

Morphology and anatomy of the flower and anthesis of Metrodorea nigra St. Hill.(Rutaceae)

Metrodorea nigra St. Hill. (Rutaceae) apresenta flores perfeitas que ocorrem em panícula. O pico de florescimento acontece em agosto e setembro. A antese é diurna e a espécie apresenta flores protândricas. As sépalas verdes e as pétalas vermelhas apresentam epiderme papilosa contendo estômatos e mesofilo parenquimático. A antera tetrasporangiada também apresenta uma epiderme papilosa, células do endotécio com espessamento parietal secundário, duas camadas médias e tapetum binucleado. O único pistilo apresenta a parede do ovário com tecido nectarífero e uma epiderme ventral meristemática, um estilete sólido e um estigma imperceptível. Os óvulos são anátropos, bitegumentados e crassinucelados e apresentam um obturator de origem funicular e placentária. O nectário, em forma de disco, circunda a base do ovário e em seu ápice há várias protuberâncias pilosas.

Tabebuia avellanedae Lor. ex Griseb. (Bignoniaceae) submitted at the flooding and the "Ethrel" and silver nitrate application

Three-month-old Tabebuia avellanedae Lor. ex Griseb. (Bignoniaceae) plants cultivated in the greenhouse were submitted to 56 days of flooding and to "Ethrel" and silver nitrate applications to find out itÆs capacity for morphological and physiological modifications to survive under flooding conditions and at which degree such responses were correlated with alterations in the ethylene level. Flooding and the "Ethrel" application caused growth reduction and epinasty in T. avellanedae and the application of silver nitrate lessened some these symptoms. Certain symptoms shown during flooding by this species and its ability to develop structures which lessen hypoxia effects, such as stem fissures and hypertrophied lenticels in the roots, modifications which enable the species to adapt to short flooding periods, could be related to increases in the ethylene concentration in the plant tissues

Morfo-anatomia do desenvolvimento do antocarpo e do fruto de Pisonia aculeata L. (Nyctaginaceae) / Morphology and anatomy of the development of the anthocarp and fruit of Pisonia aculeata L. (Nyctaginaceae)

Pisonia aculeata L. es un arbusto sarmentoso que presenta amplia distribución en los bosques tropicales y subtropicales del sur del Brasil. El estudio del desarrollo morfo-anatómico de sus antocarpos y de sus frutos es objeto del presente trabajo. Las flores en pre y postantesis y los frutos en diversas fases de diferenciación fueron recolectados en el Horto Florestal de Maringá, Paraná, Brasil y analizados morfológica y anatómicamente. El antocarpo tiene orígen en el perigonio y se caracteriza por presentar la epidermis uniseriada de la cara abaxial, donde se destacan emergencias glandulares, mesofilo parenquimático con gran número de estratos celulares, gracias a la acción del meristema ventral formado aún en la fase de perigonio, y la epidermis de la cara adaxial glabra. El pericarpio se desarrolla a partir de la pared del ovario que contiene un óvulo anátropo, bitegumentado y crasinucelado. En la semilla madura se presenta la testa delgada, perisperma, y endosperma de origen nuclear, no formándose tegmen. El antocarpo, además de la protección del fruto y semilla, presenta gran importancia en el proceso de dispersión de esta especie (epizoocoria). La estructura del fruto permitió demostrar que es correcta su clasificación como aquenio y no cariopsis como lo registrado en la literatura.

Pisonia aculeata L. is a widespread species that occurs frequently in tropical and subtropical forests in the South of Brazil. This paper presents a morphological and anatomical study of the development of its anthocarps and the fruits. Flowers in pre and post anthesis and fruits in different stages of development were collected in the Horto Florestal of Maringá, Paraná State, Brazil. The anthocarp originates in the perigone and it can be characterized by the presence of an uniseriate epidermis on the abaxial surface, presence of glandular emergences, a glabrous epidermis on the adaxial surface and a parenchymatous mesophyll. This last tissue presents a great number of cellular strata due to the action of a ventral meristema installed still in the perigone phase. The pericarp develops from the wall of the ovary. The ovule is anatropous, bitegmic and crassinucellate. The mature seed presents a thin testa with thickened cell walls just in the rafe region, perisperm and endosperm with nuclear origin, without development of tegmen. The anthocarp has great importance in the process of dispersion of this species (epizoochory). This study confirms that the fruit is an achene and not a caryopsis as affirmed in the literature.